介紹孔雀石綠試劑盒的操作步驟

　　孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結晶體，又名堿性綠、嚴基塊綠、孔雀綠，其既是殺真菌劑，又是染料，易溶于水，溶液呈藍綠色。長期以來，漁民都用它來預防魚的水霉病、鰓霉病、小瓜蟲病等，而且為了使鱗受損的魚延長生命，在運輸過程中和存放池內，也常使用孔雀石綠。

　　孔雀石綠試劑盒是應用ELISA技術研發而成的檢測產品，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。

　　孔雀石綠試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被孔雀石綠抗原，樣品殘留的孔雀石綠和微孔條上預包被的抗原共同競爭抗孔雀石綠抗體，加入酶標二抗后，經TMB底物顯色，樣品吸光度值與其殘留物孔雀石綠呈負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中孔雀石綠的含量。

　　操作步驟：

　　1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

　　2、取出需要數量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。

　　3、洗滌工作液在使用前也需回溫。

　　4、編號：將樣品和標準品對應微孔按序編號，每個樣品和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣品孔所在的位置。

　　5加標準品/樣品：加標準品/樣品50μl/孔到對應的微孔中，然后加入抗試劑50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應30min。

　　6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液250μl/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。

　　7、加酶標物：加入酶標物100μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應30min，取出重復洗板步驟6。

　　8、顯色：加入底物液A液50μl/孔，再加底物液B液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應15～20min。

　　9、測定：加入終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內讀完數據），測定每孔OD值。（若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定）。